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殺傷性T細(xì)胞（CTL）識(shí)別靶細(xì)胞形成免疫突觸后會(huì)脫顆粒，通過穿孔素、顆粒酶殺滅靶細(xì)胞，此次整理分享一篇文章，看一下CTL脫顆粒之后是如何“�；稹钡摹＞唧w內(nèi)容如下：

作者首先追蹤了CTL和靶細(xì)胞接觸后微絲的變化，發(fā)現(xiàn)：CTL接觸靶細(xì)胞后接觸點(diǎn)處微絲（綠色）密度會(huì)下降，而后又恢復(fù)；接觸點(diǎn)微絲密度的降低是伴隨著靶細(xì)胞膜破損發(fā)生的（上圖紅色標(biāo)記的是靶細(xì)胞膜；下圖紅色是靶細(xì)胞表達(dá)了Ca2＋感應(yīng)蛋白，當(dāng)靶細(xì)胞膜破損后鈣離子內(nèi)流，細(xì)胞變紅）

靶細(xì)胞膜破損和CTL脫顆粒有關(guān)，所以作者又同時(shí)追蹤了一下脫顆粒（穿孔素、顆粒酶由溶酶體釋放，所以作者追蹤的溶酶體，用的是溶酶體marker LAMP1）和微絲行為，發(fā)現(xiàn)微絲密度降低是伴隨著脫顆粒發(fā)生的，當(dāng)脫顆粒逐漸完成，微絲密度恢復(fù) – 暗示微絲給脫顆�！白屄贰保�脫完顆粒微絲恢復(fù)

作者又用SIM超分辨，在脫完顆粒、微絲恢復(fù)的細(xì)胞上看了一下微絲和溶酶體的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)：恢復(fù)后的微絲擋住了溶酶體，暗示恢復(fù)后的微絲可物理分隔CTL效應(yīng)分子和靶細(xì)胞

也用共聚焦看了一下，依然發(fā)現(xiàn)在離開微絲一定距離處才有溶酶體分布，再次暗示微絲阻隔溶酶體

實(shí)際驗(yàn)證一下微絲阻隔溶酶體，怎么驗(yàn)證呢？用微絲解聚藥latrunculin A抑制微絲（紅色）后發(fā)現(xiàn)CTL脫顆粒（綠色）增加，說明微絲的確是有阻擋脫顆粒的作用

微絲有調(diào)控脫顆粒的作用，那什么在免疫突觸附近調(diào)控微絲呢，查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)PIP2有相關(guān)作用，實(shí)際看一下：PLCγ1是種磷脂酶，可將PIP2轉(zhuǎn)化為IP3和DAG，使用PLCγ抑制劑U－73122（U－73343算是陰性對(duì)照）阻斷PIP2（綠色）降解后微絲密度（紅色）不再降低，暗示PIP2和微絲密度降低相關(guān)；PLCγ被抑制后PIP2是不會(huì)少了，但I(xiàn)P3、DAG會(huì)變少，為了排除這兩種產(chǎn)物的影響，作者在PLCγ抑制組有加了P／i（PMA和ionomycin） rescue IP3、DAG的缺陷，發(fā)現(xiàn)并不會(huì)引起微絲密度降低，說明不是IP3、DAG調(diào)控的免疫突觸附近微絲密度降低 – 綜合起來暗示TCR被激活后PLCγ調(diào)控PIP2，進(jìn)而影響微絲

換個(gè)系統(tǒng)繼續(xù)看PIP2對(duì)微絲的影響：作者構(gòu)建了一個(gè)雷帕霉素誘導(dǎo)召集可轉(zhuǎn)化PIP2酶的系統(tǒng)，加入雷帕霉素后成功召集了5－Ptase，可見隨著5－Ptase的召集增加，微絲密度下降，再次暗示PIP2和微絲密度的相關(guān)性

前面看了PIP2降微絲密度跟著降，脫顆粒后微絲密度會(huì)恢復(fù)，微絲恢復(fù)后PIP2怎么變呢？實(shí)際看一下，發(fā)現(xiàn)微絲恢復(fù)PIP2也恢復(fù)

“搞”PIP2微絲跟著變，“搞”微絲PIP2會(huì)如何呢？用藥物解聚微絲后，發(fā)現(xiàn)PIP2水平并沒發(fā)生變化，暗示PIP2在微絲的上游調(diào)控微絲

脫顆粒時(shí)微絲密度降低，脫完微絲密度恢復(fù)，暗示脫顆粒也會(huì)調(diào)控微絲，作者在脫顆粒缺陷的細(xì)胞（Rab27a缺陷）上觀察微絲行為，發(fā)現(xiàn)雖然細(xì)胞無法脫顆粒，但微絲密度仍然會(huì)下降，且無法恢復(fù) – 暗示顆粒酶、穿孔素的分泌會(huì)影響微絲密度的恢復(fù)

挺簡(jiǎn)單，觀察了CTL發(fā)射“炮彈”前后微絲的行為，發(fā)現(xiàn)了幾個(gè)調(diào)控微絲的因素（PIP2、顆粒酶穿孔素的釋放），但這些因素如何聯(lián)動(dòng)并不知道，并沒有挖到互作層面，理清分子鏈條 – 可以做，但不知道有沒有人做過，畢竟這是篇2017年的文章。不過不妨礙“細(xì)胞生物學(xué)發(fā)現(xiàn)一些細(xì)胞行為的關(guān)聯(lián)，分子生物學(xué)去找關(guān)聯(lián)細(xì)胞行為的分子鏈條”這一思路對(duì)科研工作的指導(dǎo)……

Alex T． Rittera， Senta M． Kapnickc， Sricharan Murugesand， Pamela L． Schwartzbergc， Gillian M． Griffiths and Jennifer Lippincott－Schwartza，． Cortical actin recovery at the immunological synapse leads to termination of lytic granule secretion in cytotoxic T lymphocytes ［J］． PNAS， July 17， 2017．

主題：CNS前沿文獻(xiàn)追蹤 – 病毒衣殼在細(xì)菌內(nèi)部的運(yùn)動(dòng)模式

時(shí)間：9月2日 周三  19：00 － 20：00

主講人：于博士

參考文獻(xiàn)：

Vorrapon Chaikeeratisak， Kanika Khanna， Katrina T． Nguyen， Joseph Sugie， et al． Viral Capsid Trafficking along Treadmilling Tubulin Filaments in Bacteria ［J］．Cell． 2019．